氢气透析液的血透影响能量代谢改善透析联系疲钝

有联系报谈，罗致水电解产生的富氢气（H₂）透析液的血液透析（E - HD）可缓解透析联系疲钝，但其与代谢景色的关联仍不解确。81名接受步履血液透析（HD）的患者被分为3组 [A组（n = 25，30.9%）：伴有步履减少的疲钝—— 亚组A1：慢性执续性疲钝（n = 11），A2：仅在透析日出现疲钝（n = 14）；B组：无步履减少的疲钝（n = 24，29.6%）；C组（n = 32，39.5%）：无疲钝]，并对他们在接受E - HD颐养12个月后的疲钝景色、体魄身分和代谢景色变化进行了联系。各组患者的基线特征无显贵各异。在开动E - HD颐养后的12个月里，A组患者的疲钝感显贵舒适，而B组和C组无变化。生物电阻抗分析娇傲，A1组无显贵变化，但A2组尽管体重无显贵变化，体脂却显贵减少，骨骼肌量显贵加多。富集分析标明，A组和C组在基线时，脂肪酸代谢、柠檬酸轮回和糖酵解等代谢道路存在显贵各异，而E - HD舒适了这些各异。E - HD可能通过改变患者的能量代谢来扼制透析联系疲钝。E - HD可能代表了一种特出传统基于溶质断根的透析疗法的尿毒症颐养新范式。

疲钝被觉得是透析患者一项要道的自我叙述效果[1 - 3]。疲钝不仅影响日常步履，还因食欲和体魄步履减少，被视为养分不良和朽迈的一个风险因素[4]。此外，疲钝已被确定为患者预后的一个孤苦预测因素[5 - 8]，这标明疲钝症状可能酿成一个无益的轮回。因此，了解透析联系疲钝的病理生理学机制并制定灵验的颐养政策，是医学上濒临的要紧挑战。

临床上，疲钝症状可能在血液透析（HD）开动时出现，主不雅症状大多局限于透析日，也可能非论是否透析齐执续存在[8]。然而，当今尚不明晰它们是否属于不同的情况。对于透析疲钝的病理生理学存在好多不确定性。尿毒症、养分、贫血和日用品等因素[9]，以及HD系统联系问题，如生物相容性联系的氧化应激[10 - 11]，包括铁剂的使用[12]，齐可能导致疲钝的发生。血液透析系统中的生物相容性问题仍未得到经管。血液与透析建造的战役会刺激白细胞、血小板和补体激活，导致炎症细胞因子开释、血小板汇聚、中性粒细胞脱颗粒（如髓过氧化物酶开释）和中性粒细胞胞外陷坑的酿成[13 - 15]。当今，尚窝囊够齐全扼制这些反应的颐养系统。

氢气（H₂）具有生物效应，如断根线粒体中的活性氧，并通过主要的氧化还原调动因子NF - E2联系因子2（Nrf2）激活庸碌的抗炎和抗氧化系统[16 - 23]。基于H₂的抗氧化和抗炎特质，咱们征战了电解水血液透析（E - HD），即在透析液中添加H₂以提升生物相容性[24 - 26]。联系标明，E - HD可裁汰HD颐养技术的氧化应激[27]，并通过执续颐养更正患者的基础氧化还原状态[28]。此外，咱们的联系团队已孤苦报谈，接受E - HD颐养的患者疲钝感得到缓解[29 - 32]。这些不雅察效果标明，生物相容性对透析联系疲钝发展的影响可能很大。然而，通过H₂改善生物相容性从而在临床上扼制疲钝的机制仍知之甚少。

因此，本联系旨在对E - HD颐养技术的疲钝进行长久评估，并从体魄代谢的角度联系疲钝的变化过火机制。

1. 疲钝评估及按疲钝程度对患者分组（图1）

图1 步履血液透析 M0 的患者分组。

- 通过对受试者使命特征（ROC）弧线的分析，确定数字评重量表（NRS）评分≥4为存在彰着疲钝的临界值，在本联系中，透析日原始疲钝量表3级或4级被界说为伴有日常生存步履（ADL）减少的疲钝（NRS = 3.75：明锐性0.909，特异性0.764；NRS = 4.5：明锐性0.909，特异性0.833）。一样，NRS = 0或1在本联系中被界说为无疲钝（NRS = 1.5：明锐性0.936，特异性0.806；NRS = 2.25：明锐性0.851，特异性0.861对应1级）。凭据效果，患者被分为3组：A组（NRS为4或更高界说为伴有ADL减少的疲钝：n = 25，30.9%），B组（NRS为2或3界说为无ADL减少的疲钝：n = 24，29.6%），C组（NRS为0或1界说为无疲钝：n = 32，39.5%）。此外，A组又细分为两种类型：A1组，透析日和非透析日均有慢性执续性疲钝（NRS 4或更高）（n = 11）；A2组，仅在透析日有疲钝（n = 14）。

2. 基线时按疲钝程度分离的患者东谈主口统计学特征及12个月不雅察期内疲钝水平的变化

- 96名患者中有92例得到了本联系的知情甘愿，尔后对他们进行了12个月的随访。在此技术，6名患者因就医便利转至其他诊所，2名患者因严重肺炎牺牲（1例为新冠病毒感染，1例为社区得到性肺炎），3名患者因在联系技术对问卷反馈欠安而退出（1例因长久入院，2例因不合作访问）。最终，81例患者完成了12个月的访问。对这81名患者的数据进行分析（男性60例；74.1%，平均年岁71.4岁，平均透析时长10.6年）。

- 各组患者的特征见表1。3组患者在透析日NRS、非透析日NRS、年岁方面存在显贵各异，其他方面未发现显贵各异。

- 通过游离DNA（cfDNA）和髓过氧化物酶与DNA复合物（MPO - DNA）水平来联系动作生物相容性象征物的中性粒细胞胞外陷坑（NETosis）表象，但在基线（表1）或随访6个月、12个月时，各组均未发现显贵各异；A组cfDNA（单元）：6个月时为3.70 ± 0.75，12个月时为3.83 ± 0.91；B组6个月时为3.46 ± 0.90，12个月时为3.57 ± 0.95；C组6个月时为3.67 ± 0.99，12个月时为3.72 ± 1.11。A组MPO - DNA（单元）：6个月时为2.86 ± 1.89，12个月时为2.82 ± 1.74；B组6个月时为2.59 ± 1.23，12个月时为3.01 ± 1.49；C组6个月时为2.44 ± 1.10，12个月时为2.64 ± 1.31。

表 1 基线（第 0 个月）按疲钝等第分离的患者特征。

表 2 A 组亚组的患者特征：基线（第 0 个月）和不雅察截止（第 12 个月）。

- 表2娇傲了A组亚组患者的特征。A1和A2在基线（M0）时骨骼肌量存在显贵各异，A2在M0和M12之间的脂肪量、骨骼肌量和细胞外液与总体液百分比（ECV/TBW%）存在显贵各异。

图2 12个月内透析日和非透析日NRS的变化。

- 图2a和图2b分别娇傲了12个月内透析日和非透析日NRS的变化。A组透析日NRS显贵下落，而非透析日未不雅察到统计学变化。B组和C组在透析日和非透析日均未发现显贵变化。

- 对于A1组和A2组，与M0基线比较，A1组和A2组在M12时透析日和非透析日的NRS均显贵下落。除A1组骨骼肌量显贵较低外，基线参数无其他各异。在M12时，与M0比较，A2组脂肪量显贵减少，骨骼肌量显贵加多，其他参数无显贵变化。

- A组NRS的统计效果存在各异（即通过重复测量方差分析，A组非透析日从M0到M12的NRS无统计学各异，而通过配对t阅览，A1和A2亚组M0和M12之间NRS显贵下落）。对于原因，咱们觉得样本量小以及A2组M12数据的非正态散布（存在极端值）可能导致了这一令东谈主困惑的效果。A组（A1和A2）的亚组分析呈现出与图2b换取的趋势。

3. 用于代谢组分析的患者样本集及尿毒症毒素的测量（图3）

- 对从A组和C组抽取的35名患者进行代谢组分析和尿毒症毒素测量，以比较疲钝患者和非疲钝患者之间，以及步履HD（S - HD）的M0和E - HD的M12之间的各异。对于患者样本集，S - HD（M0）时的疲钝组和非疲钝组界说为“疲钝 - S（FS）”，E - HD（M12）时界说为“疲钝 - E（FE）”，统共患者在S - HD（M0）和E - HD（M12）之间的比较界说为“EHD”。万般本集患者数目细则见图3。

图3万般本集患者数目.

图4 .170种个体代谢物概述。

4. 详细代谢组学分析及E - HD对透析疲钝的可能影响

- 通过非靶向代谢组学分析检测到170种个体代谢物，富集代谢物集（前25位）的概述分别见图4a（患者样本集：FS）、图5a（患者样本集：EHD）和图6a（患者样本集：FE）。各组间几种代谢物存在显贵变化。3个患者样本辘集每种代谢物的显贵变化细则分别见图4b、图5b和图6b。

图5各式代谢物的显贵变化

图6各式代谢物的显贵变化

- 图7娇傲了各患者样本集富集代谢物集之间互联系系的归来。FS和EHD有16个共同的代谢物集，FS和FE有12个共同的代谢物集。在FS和EHD的共同代谢物辘集，8个代谢物集与不与FE相通的代谢物换取（道路A），8个与FS和FE换取（道路B）。图8展示了E - HD改变的代谢道路要道候选者的默示图。

图7各患者样本集富集代谢物集之间互联系系。

图8展示了E - HD改变的代谢道路要道候选者的默示图。

5. 尿毒症毒素浓度（表3、表4）

- 基线（M0）时，疲钝组和非疲钝组血清中尿毒症毒素浓度无显贵各异（患者样本集：FS）。在M0和M12的总体比较中（患者样本集：EHD），马尿酸、对甲酚硫酸盐、乙二醛和3 - 脱氧葡萄糖醛酮无显贵变化，而M12时硫酸吲哚酚和甲基乙二醛显贵下落。

已有联系报谈E - HD可改善透析联系疲钝[29 - 32]。本联系评估了疲钝的长久变化，并在引入E - HD后联系了代谢景色和尿毒症毒素，以探索其抗疲钝作用背后的机制。在步履HD技术资格伴有步履减少的疲钝的患者，在12个月内疲钝感显贵改善。其中，仅在透析日出现疲钝的患者，体脂肪量显贵减少，而骨骼肌量显贵加多。代谢组分析娇傲，基线时疲钝组和非疲钝组在能量代谢方面存在显贵各异，12个月时E - HD舒适了这些各异。两组在基线时尿毒症毒素谱无显贵各异，但E - HD 12个月后硫酸吲哚酚和甲基乙二醛水平显贵下落。

在本联系中，咱们基于临床上它们可能是不愁然况的假定，将A组患者分为两个亚组，即在透析日和非透析日均有执续性疲钝的患者（A1组），以及仅在透析日有疲钝的患者（A2组）。

两组之间，基础疲钝水随和基础骨骼肌量存在各异。此外，两组间体魄身分的变化（即M0与M12的脂肪量、骨骼肌量和ECV/TBW）也不同。这些数据可能撑执咱们的不雅点。然而，两组在M12时与M0比较，透析日疲钝均显贵下落。此外，A1组非透析日疲钝显贵下落（M0与M12比较），A1组和A2组在M12时无统计学各异。基于这些效果，咱们臆测E - HD可能扼制了与HD联系的疲钝病理因素，从而改善了A1组过度的疲钝。这些效果可能标明两组之间存在共同的病理机制。详细这些效果，咱们假定的灵验性仍有待考证，需要进一步联系来得出论断。

透析患者疲钝的病理生理学在很大程度上仍不明晰。在本联系中，咱们凭据NRS疲钝水平将HD患者分为3组。对于患者特征，疲钝患者（A组）年岁较大，女性居多。但除此以外，在医学布景、体魄身分和实验室数据（如血红卵白、血皎皎卵白和C反应卵白）方面未发现各异。通过cfDNA和MPO - DNA水平联系动作生物相容性象征物的中性粒细胞胞外陷坑表象，但在基线或随访技术未发现显贵各异。然而，代谢组分析效果标明，基线（M0）时疲钝组和非疲钝组（患者样本集：FS）在代谢谱方面存在显贵各异，包括能量代谢道路。与非疲钝组比较，疲钝组脂肪酸代谢和糖酵解相对增强，而在柠檬酸轮回中，尽管柠檬酸和异柠檬酸水平较高，但琥珀酸显贵裁汰，标明异柠檬酸之后的代谢存在阻断。这标明能量代谢的潜在散乱可能与透析联系疲钝联系。真义的是，在伴有疲钝和困顿的疾病中，如肌痛性脑脊髓炎/慢性疲钝详细征[33 - 34]、系统性红斑狼疮[35]、法布里病[36]和癌症[37]，均有能量代谢散乱的报谈。透析患者的疲钝可能与这些疾病存在病理同源性。

从S - HD改革为E - HD后，先前联系报谈了自主神经均衡的归附[30]、氧化应激的扼制以及抗氧化剂耗竭的防患[31]。本联系标明，在S - HD和E - HD时，疲钝组和非疲钝组的代谢谱存在各异，此外，S - HD和E - HD之间也存在各异（图4a、图5a和图6a）。

如图7归来，凭据富集分析效果，咱们臆测了4个可能影响疲钝发展的道路组，即被E - HD更正的疲钝联系因素（道路A）、可能受E - HD影响的因素（道路B）、不受E - HD影响的疲钝病理常见事件（道路C）以及齐全不受E - HD影响的因素（道路D）。被E - HD更正的道路A包括能量代谢，如脂肪酸合成/降解、糖酵解/糖异生和二羧酸代谢——可能波及多元醇道路。另一方面，柠檬酸轮回被觉得是一个可能受E - HD影响但未得到充分更正的疲钝联系因素（道路B）。基于这些效果，咱们臆测E - HD可通过插手糖酵解、脂肪酸代谢和柠檬酸轮回来改善透析联系疲钝。图8归来了可能被E - HD改变的中心代谢道路；在S - HD中相对增强的代谢道路，即糖酵解和脂肪酸代谢，在E - HD中可能受到扼制，而在S - HD中相对扼制的柠檬酸轮回，在E - HD中可能得到改善。此外，与S - HD比较，E - HD中谷胱甘肽合成可能更易进行。

对于柠檬酸轮回功能阻挠，似乎琥珀酸前体琥珀酰辅酶A和α - 酮戊二酸的酿成不及可能与该机制联系（图8）。对于前者，不成排斥肠谈微生物群产生的短链脂肪酸丙酸供应不及可能参与其中。在S - HD和E - HD的比较中（患者样本集：EHD），丙酸代谢存在显贵各异，且在E - HD中不雅察到源自α - 酮戊二酸的脯氨酸和鸟氨酸水平较高，这标明E - HD归附了柠檬酸轮回功能。此外，在E - HD时疲钝组和非疲钝组的比较中（患者样本集：FE），糖酵解和脂肪酸代谢未被确定为显贵因素。详细这些效果，对于透析联系疲钝的机制，咱们臆测如其他场合所报谈[38]，在 mitochondrial 功能受损的状态下，糖酵解和脂肪酸合成可能至少部分增强，动作ATP生成的赔偿机制。咱们臆测E - HD可能影响了疲钝患者的线粒体功能，因为宽敞叙述标明H₂通过部分扼制氧化应激对线粒体具有保护作用[39 - 40]。最近有报谈称棕榈酸通过线粒体毁伤在脂毒性心肌细胞毁伤中起中枢作用[41]。真义的是，迪士尼彩乐园靠谱吗在本联系中，S - HD疲钝组中不雅察到棕榈酸显贵加多，而E - HD使其改善，这可能标明E - HD如其他场合所报谈[42]，对腹黑具有保护作用。

此外，与M0比较，M12时焦谷氨酸的减少可能标明引入E - HD后谷胱甘肽代谢的归附。这可能意味着E - HD不错提升抗氧化才能或减少氧化应激刺激，防护抗氧化剂耗竭，如其他场合所报谈[27, 30]。改善的能量代谢和抗氧化才能可能有助于临床疲钝的舒适，同期A2组出现养分改善，即引入E - HD后肌肉量加多，这标明患者从证实代谢环境搬动为合成代谢状态。然而，这些经过之间的互联系系仍然是假定性的，联结这种病理生理学依然畴前的一个挑战。

真义的是，在E - HD（患者组：FE）中，疲钝组和非疲钝组之间的富集代谢物集与S - HD（患者组：FS）时不同，况兼发现了包括养分元素联系的因素，如牛磺酸和支链氨基酸（缬氨酸、亮氨酸）的代谢。咱们臆测，在E - HD改善能量和氧化还原状态后，这些与疲钝联系的因素才得以涌现。对于养分问题，有联系报谈，血液透析（HD）患者血浆中的支链氨基酸水平低于健康受试者 ，同期其水平与HD患者的疲钝程度呈正联系 。在分内析中，非论罗致何种HD方法，疲钝组中的缬氨酸和亮氨酸水平每每较高，这可能反应出由于肌肉量减少，疲钝患者体内支链氨基酸的肌肉代谢延伸 。牛磺酸是一种具有抗氧化特质的非必需氨基酸，可从海鲜等膳食开头中招揽。据报谈，其在HD患者体内的较高水平与较低的疲钝程度联系 。基于该报谈和本联系效果，考证疲钝患者是否能从包括补充牛磺酸在内的养分撑执中获益，是一项临床挑战。

在基线时（患者组：FS），疲钝患者和非疲钝患者的尿毒症毒素谱未发现各异。然而，对统共患者进行比较后发现，硫酸吲哚酚和甲基乙二醛这两种氧化应激率领物 在E - HD颐养12个月后显贵减少。

硫酸吲哚酚由肠谈内色氨酸代谢产生，随后在肝脏中进一步代谢，它是一种与卵白质结合的尿毒症毒素，难以通过透析断根 。因此，E - HD能显贵裁汰该分子的水平，这在临床上值得眷注。由于色氨酸过火肠谈代谢居品色胺和吲哚乙酸的水平保执不变（数据未娇傲），对于硫酸吲哚酚的减少，可能存在几种机制，即扼制肠谈细胞中吲哚的产生、减少体内硫酸吲哚酚的生成，或者如其他联系所示，E - HD加多了其断根率 。接洽到E - HD可能改变肠谈微生物群产生短链脂肪酸（丙酸）的情况，HD经过中的H₂负荷是否会影响菌群失调，依然畴前联系的一个课题。

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甲基乙二醛是在糖酵解和多元醇道路增强经过中产生的一种尿毒症毒素，会率领氧化应激 。近期叙述标明，甲基乙二醛可导致肌肉祖细胞中的线粒体毁伤，进而引发尿毒症肌少症 。疲钝组骨骼肌量有裁汰的趋势，这突显了甲基乙二醛减少的临床风趣。

本联系存在一些局限性，包括罗致单臂不雅察性想象，对代谢组分析的证明是基于假定而非平直数据，况兼无法排斥联系技术外部因素或患者里面步履变化对疲钝评估的影响。此外，由于病例数目有限，本联系无法精通评估A1组和A2组之间的各异，咱们觉得在慢性疲钝类型中，样貌因素可能会产生影响 。

尽管如斯，咱们觉得本联系标明E - HD可能通过影响能量代谢以及潜在的抗氧化代谢来缓解疲钝。然而，E - HD影响这些代谢系统果然凿机制仍不明晰。近期联系标明，H₂可平直影响线粒体功能 ，并率领Nrf2抒发 ，从而调动机体的氧化还原系统。探究电解水中所含的H₂是否通过激活Nrf2来改善线粒体功能并增强举座抗氧化系统，依然畴前的一项要道挑战。

总之，E - HD似乎大致扼制透析联系疲钝。其机制可能波及能量代谢和抗氧化系统的改变，以及与氧化应激联系的尿毒症毒素的减少。E - HD动作一种新式的尿毒症颐养方法，通过调动机体代谢，特出了传统基于溶质断根的透析疗法。

患者

本前瞻性不雅察联系的参与者为2020年10月至2021年9月技术在日本东京圣路加外洋病院门诊接受通例透析颐养的患者。统共患者均如期接受步履HD颐养，每周三次，每次4 - 5小时，使用高性能膜透析器（膜材料：聚砜、聚醚砜、聚甲基丙烯酸甲酯和三醋酸纤维素）。自2020年10月第一周起，门诊统共患者开动接受E - HD颐养，并在尔后如期进行。改革为E - HD颐养无任何禁忌症，除透析液改变外，透析决策无任何变化。邀请统共门诊HD患者（n = 96）参与本联系。96名患者中有92例得到了本联系的知情甘愿，尔后对他们进行12个月的随访。在此技术，6名患者因就医便利转至其他诊所，2名患者因严重肺炎牺牲（1例为COVID - 19感染，1例为社区得到性肺炎），3名患者因在联系技术对问卷反馈欠安而退出（1例因长久入院，2例因不合作访问）。最终，81例患者完成了12个月的访问。对这81名患者（60名男性；占74.1%，平均年岁71.4岁，平均HD透析时长10.6年）的数据进行分析。

本联系决策已得到圣路加外洋病院伦理审查委员会的全面批准（批准日历：2019年6月19日；联系编号：18 - RZ013）。统共方法均按照联系指南和规定践诺。

疲钝评估

如其他文件报谈 ，本联系使用数字评重量表（NRS）和咱们自行想象的原始疲钝量表对患者疲钝进行评估。统共问卷均罗致书面格式。NRS是一种一维量表，左端清楚“齐全不累（0）”，右端清楚“极端困顿（10）”。咱们的原始疲钝量表是患者的四级自我评筹谋表：1级（无疲钝），患者步履如常，无任何疲钝感；2级（轻度疲钝），患者步履如常，但嗅觉疲钝；3级（中度疲钝），患者即使从事轻度使命也会感到疲钝；4级（重度疲钝），患者嗅觉极度疲钝并入睡。因此，展望1级和2级患者的日常生存步履（ADL）大致督察，而3级和4级患者的ADL会大幅下落。

统共患者在步履HD技术的第一个时分点，即在开动EHD系统前2周内（M0），使用问卷进行疲钝评估，问卷问题为“你在之前的透析日以及透析后第二天嗅觉有多疲钝？”。在开动E - HD系统后的第1个月（M1）、第3个月（M3）、第6个月（M6）和第12个月（M12），反复盘问NRS（透析日和非透析日）。在每个时分段的特定一周内，当场遴荐一个透析日，在HD开动前进行疲钝评估。

E - HD系统概述

简而言之，E - HD溶液的制备经过如下：自来水供应至电解水 - 血液透析系统（日本大阪Trim Medical Institute Co.），在该系统中，水经度日性炭过滤和软化处理，然后通过曙光极和阴极电极板供应直流电进行电解。阳极一侧的水被排出，阴极一侧的水（电解水）被辘集起来供应给反浸透模块。电解强度被调整至蓄意H₂浓度。由电解水 - 血液透析系统产生的含H₂反浸透水被用于制备HD溶液。流入的E - HD溶液身分与CHD使用的透析溶液换取，不同之处在于E - HD中含有熔解的H₂，而电解质水平或pH值无各异。透析液中的H₂水平在70 - 130 ppb范畴内。使用DH Meter（DH - 35A；日本东京DKK - TOA公司）测量HD溶液中熔解的H₂量。

测量

在基线期（M0）以及联系技术的测试点（1个月（M1）、3个月（3M）、6个月（6M）、12个月（12M）），在HD颐养前后从统共患者处采集血样。采样前患者可日常进食。血样用乙二胺四乙酸离心处理，统共样本均储存于 - 80℃，直至需要测量时取出。

对M0和M12的血浆样本（A1组，n = 11；A2组，n = 12，C组，n = 12）进行尿毒症毒素和羰基化合物的测量以及代谢组分析。在A2组中，有2例因样本不及未进行测量，在C组中，从32例中当场遴荐12个样本。

NETosis的象征物

平直在生物体液中检测游离DNA。领先将SYBR Gold核酸凝胶染色剂（好意思国Invitrogen公司）在二甲基亚砜（好意思国Sigma - Aldrich公司）中按1:1000稀释，然后在磷酸盐缓冲盐水（以色列Beth Haemek的Biological Industries公司）中按1:8稀释。将20 μL DNA步履溶液（好意思国Sigma - Aldrich公司）和测试样品分别加入玄色96孔板（德国Greiner Bio - One公司）中。向每个孔中加入40 μL上述制备的SYBR Gold溶液（最终稀释度1:10,000），使用96孔荧光计（好意思国PerkinElmer公司）在辐射波长535 nm和引发波长485 nm下测量荧光。

为检测NET，参考Lood的叙述 进行以下门径以测量髓过氧化物酶（MPO）和DNA复合物（MPO - DNA）。将96孔微量滴定板（Corning公司）用小鼠单克隆抗MPO抗体（4 μg/ml，Biorad公司，克隆4A4）在4℃下包被过夜，然后用1%牛血皎皎卵白的磷酸盐缓冲盐水在室温下闭塞2小时。闭塞后，加入血浆样本（10%）并在4℃下孵育过夜。为进行检测，加入抗双链DNA - 辣根过氧化物酶抗体（稀释1/100，Roche Diagnostics公司），在室温下孵育2小时。用3,3′,5,5′ - 四甲基联苯胺（BD Biosciences公司）显色反应，加入2 N硫酸停止反应。使用酶标仪（Synergy，BioTek公司）在450 nm处测量吸光度。分离的NETs用作步履弧线，1 U/ml相配于10,000个中性粒细胞开释的NET。

血浆代谢物

罗致基于代谢组学方法的气相色谱 - 质谱联用仪（GC - MS）测量血浆代谢物水平。将50 μL血浆与250 μL含有55%甲醇和22%氯仿的溶液羼杂，该溶液熔解于含有0.5 mg/mL 2 - 异丙基苹果酸（好意思国Sigma - Aldrich公司）的蒸馏水中。然后，将样品在ThermoMixer C（Eppendorf公司）中于37℃、1200 rpm飘舞孵育30分钟。样品在4℃、16,000 × g下离心3分钟。辘集200 μL上清液，并加入200 μL蒸馏水。样品在4℃、16,000 × g下再次离心3分钟。取250 μL上清液，使用挥发器在减压下干燥并冻干。将80 μL熔解于吡啶中的20 mg/mL甲氧胺盐酸盐（好意思国Sigma - Aldrich公司）与冻干样品羼杂，超声处理20分钟，并在30℃、1200 rpm下飘舞90分钟。接下来，加入40 μL N - 甲基 - N - 三甲基硅基 - 三氟乙酰胺（MSTFA）（日本东京GL Sciences公司）进行繁衍化。羼杂物在37℃、1200 rpm下羼杂30分钟，在4℃、16,000 × g下离心5分钟，取1 μL所得上清液进行GC - MS分析。GC - MS分析使用GC - MS QP2010 Ultra（日本岛津公司），配备熔融石英毛细管柱（BPX - 5；30 m × 0.25 mm内径，膜厚：0.25 μm；日本岛津公司），进样口前端温度为250℃，氦气通过柱子的流速为39.0 cm/秒。柱温在60℃保执2分钟，然后以15℃/分钟的速率升至330℃，并保执3分钟。接口和离子源温度分别为280℃和200℃。所稀有据通过GC - MS分析得到。使用Smart Metabolites Database（日本岛津公司）中指令的保留时分。为进行半定量评估，计较每个定量离子的峰面积，并使用2 - 异丙基苹果酸峰面积进行归一化。

尿毒症毒素

为测量尿毒症毒素进行样品制备时，将75 μL含有1.25 μg/mL硫酸吲哚酚 - d3和2.5 μg/mL马尿酸 - d5的0.1%甲酸甲醇加入到25 μL每份血浆中，涡旋数秒。然后，样品超声处理5分钟，并在4℃、16,400 × g下离心20分钟。上清液通过0.2 μm Duo - filter膜（日本京齐YMC Co., Ltd.公司）过滤。使用与TSQ Quantum Ultra质谱仪联用的Nanospace SI - 2 3033，以负离子模式通过液相色谱 - 串联质谱（LC - MS/MS）对硫酸吲哚酚和马尿酸进行定量分析。对于硫酸吲哚酚和马尿酸的测量，每个样品（1 μL）注入100 × 2.0 mm CAPCELL PAK C18 MG III，3 - μm柱（日本大阪OOSAKA SODA公司），配备Scherzo SM - C18保护柱5 × 2.0 mm（日本京齐Imtakt Corporation公司），流速为0.2 mL/分钟。对于梯度洗脱，流动相A为纯水中10 mM醋酸铵，流动相B为乙腈。线性和迟缓梯度步履如下：0 - 8分钟：0 - 100%溶剂B；8 - 12分钟：100%溶剂B；12 - 15分钟：0%溶剂B。通过MS/MS在遴荐反应监测（SRM）模式下进行定量分析，监测前体离子到居品离子的搬动和碰撞能量：硫酸吲哚酚的m/z 212 → 80，21 V；硫酸吲哚酚 - d4的m/z 216 → 80，30 V；马尿酸的m/z 178 → 134，13 V；马尿酸 - d5的m/z 183 → 139，27 V；对甲酚硫酸盐的m/z 187 → 107，23 V。喷雾电压为2500 V，汽化器温度为450℃，毛细管温度为220℃。

体魄身分和贯通功能

在M0和M12的血液透析步履截止20分钟后，统共患者罗致横卧位，使用Seca®医用体魄身分分析仪525（德国汉堡Seca GmbH & Co. KG公司）进行生物电阻抗分析。通过生物电阻抗分析评估的参数包括脂肪量、骨骼肌量、细胞外液（ECW）和总体液（TBW） 。在M0和M12对统共患者进行简便精神状态查验表（MMSE）查验。

变量凭据情况以平均值 ± 步履差（SD）或百分比（%）清楚。统计学显贵性设定为P < 0.05。组间比较罗致配对t阅览、非参数Wilcoxon象征秩阅览和卡方阅览。时分程度分析罗致重复测量方差分析和Bonferroni法进行多重比较。使用SPSS 22.0版（好意思国纽约州阿蒙克市IBM公司）进行统计分析，使用JMP Pro软件16.0.0版（好意思国北卡罗来纳州卡里市SAS Institute Inc.公司）进行GC - MS测量分析。

在代谢组学中，代谢物集富集分析用于识别与感有趣的表型（如疲钝的存在）联系的改变的代谢物集（代谢道路），使用的算法基于大门户据库（在本联系中为京齐基因与基因组百科全书（KEGG））构建的通用代谢物辘集运行 。

免责声明：本文不雅点试验开头于氢想云迪士尼彩乐园3违法吗，纳诺巴伯氢友会分歧其科学性、灵验性等作任何格式的保证。若试验波及健康提出，仅供参考勿动作健康带领依据。温馨辅导：氢气不是药物，不成代替药物颐养疾病。